同田專利CN1986536B_一種高純度紫杉醇化合物的制備方法

專利基本信息

說明書

一種高純度紫杉醇化合物的制備方法

技術領域

[0001] 本發明涉及植物藥物的制備方法，尤其涉及一種高純度紫杉醇化合物的制備方法。

背景技術

[0002] 紫杉醇（paclitaxol)是一種新型的天然抗癌藥物，從紅豆杉中提取得到，具有很好的抗癌活性，對多種腫瘤均有明顯的療效，其抗癌機理在于促進微管聚合，形成穩定的不具活性的微管聚合物，從而影響腫瘤細胞的有絲分裂的進行，造成細胞死亡。1992年美國食品藥品監督管理局（FDA)批準紫杉醇上市，目前，已證明紫杉醇對乳腺癌、卵巢癌、頭頸部腫瘤及非小細胞肺癌有十分顯著的療效，已逐步應用于此幾種癌的治療中。

[0003] 紫杉醇的結構式如下：

[0004]

[0005] 紫杉醇的分子式C47H51NO14,物化特性：熔點222°C，易溶于氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙

醇、甲醇，不溶于石油醚、正己烷等。

[0006] 目前提取紫杉醇類化合物的方法為吸附柱層析或分配柱層析法，然而該類方法需消耗大量的層析填料，而且在生產過程中需經常更換和清洗、活化填料，不僅使生產成本很高，而且工作量很大，得率低。

[0007]高速逆流色譜技術（High-Speed Countercurrent Chromatography, HSCCC)是近 30年發展起來的一種連續的無需任何固體支持物的高效、快速的液液分配色譜分離技術， 其原理是利用螺旋柱在行星運動時產生的離心力，使互不相溶的兩相不斷混合，同時保留其中的一相（固體相），利用恒流泵連續輸入另一相（流動相），隨流動相進入螺旋柱的溶質在兩相之間反復分配，按分配系數的次序，被依次洗脫。在流動相中分配比例大的先被洗脫，反之，在固體相中分配比例大的后被洗脫。它避免了固態支持體或載體帶來的各種問題——樣品容易被吸附、損耗和變性，使其他液相色譜技術進行制備量分離時，其分配效率會明顯降低，溶劑消耗量大，HSCCC保證較高峰型分辨率，分離量大、樣品無損耗、回收率高、 分離環境緩和，節約溶劑。高速逆流色譜儀能直接進大量粗提物樣品或合成混合物，分離結果能夠達到相當高的純度，甚至能直接接質譜儀等儀器。因此，HSCCC具有操作簡便，理論回收率為100%，重現性好和分離效率高、分離量較大的特點，已廣泛應用于生物、醫藥、環保等領域化學物質的制備分離和純化，使其成為制備紫杉醇的較佳手段。 發明內容

[0008] 本發明要解決的技術問題是克服現有分離技術的缺陷，采用高速逆流色譜法 (HSCCC)，提供一種高純度紫杉醇化合物的制備方法，該方法收率高，成本低。

[0009] 本發明的一種高純度紫杉醇化合物的制備方法包括如下步驟：

[0010] (1)前處理

[0011] 將200mg-5g紫杉醇粗提物，以20ml_250ml固定相加熱溶解待用；

[0012] (2)制備型高速逆流色譜儀分離

[0013] 將溶劑體系A，B，C，D組分按體積比3-7 ： 3-7 ： 3-7 ： 3_7置于分液漏斗中，搖勻靜置分層。待平衡一定時間后，將上相和下相分開，上相作為固定相使用，下相作為流動相使用。進樣前，先用固定相存滿整個柱子，調整主機轉速，將流動相泵入柱內，待整個體系建立動態平衡后，由進樣閥進樣，根據檢測器紫外圖譜接收目標成分。

[0014] 所述的溶劑A組分是正構烷烴，選自石油醚、正庚烷、正己烷中的一種；

[0015] 所述的溶劑B組分選自乙醚、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷中的一種；

[0016] 所述的溶劑C組分是脂肪醇或脂肪酮，脂肪醇選自甲醇、乙醇、異丙醇中的一種， 脂肪酮選自丙酮、丁酮中的一種；

[0017] 所述的溶劑D組分為水；

[0018] 所述的溶劑體系體積比是3 ： 7 ： 3 ： 7、3 ： 3 ： 3 ： 4或30 ： 30 ： 70 ： 30 ；

[0019] 所述的溶劑可以優選正己燒一乙醚一甲醇一7jC，體積比3 ： 7 ： 3 ： 3。

[0020] (3)后處理

[0021] 將收集到的紫杉醇流分分別置于圓底燒瓶中減壓濃縮至干，得到白色固體，以甲醇一水溶解，于O?10°C下結晶，過濾干燥后可得到白色細針狀結晶，結晶經HPLC檢測，純度在99%以上。

[0022] 本發明方法采用了高速逆流色譜分離技術，是一種連續的無需任何固體支持物的高效、快速的液液分配色譜分離技術，它克服了固態支持物或載體不可逆吸附、損耗和變性，使被分離物回收率高，理論達100%，本發明實際達到99%以上。又因為采用優選的溶劑體系，可以高效率的分離，獲得高純度的紫杉醇化合物單體（達到99%以上），適用于各種工藝途徑制備的紫杉醇提取物。本生產方法采用的原料為市售各種規格的紫杉醇粗提物，采用制備型高速逆流色譜系統分離，經一次分離后可得到紫杉醇。

[0023] 本方法保證了較高峰形分辨度，具有分離量大、回收率高、分離環境緩和、節約溶劑、操作簡便等優點，適合從試驗室制備到工業化生產的各種規模的紫杉醇分離制備。

附圖說明

[0024] 圖1是高純度紫杉醇化合物的制備過程。 具體實施方式

[0025] 下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍。此外應理解，在閱讀了本發明講授的內容之后，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。

[0026] 實施例1

[0027] 采用柱容積為300ml的高速逆流色譜系統分離（配有NS-1007泵，8823A-UV紫外檢測器和^kogaWa3057便攜式記錄儀)。選取正己烷一乙酸乙酯一丙酮一水作為溶劑體系，按7 :3:5: 5體積比將上述溶劑組分配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時間后，將上相（固定相）和下相（流動相）分開。

[0028] 稱取200mg紫杉醇粗提物，以20ml固定相加熱溶解待用。進樣前，用固定相存滿整個柱子，調整主機轉速，將流動相泵入柱內直至建立動態平衡，由進樣閥進樣；然后根據檢測圖譜，接收目標成分。目標餾分蒸干后用甲醇結晶可得到紫杉醇的白色細針狀結晶，經過HPLC-UV的檢測，純度在99%以上。

[0029] 實施例2

[0030] 采用柱容積為IOOOml的高速逆流色譜系統分離。選取石油醚一氯仿一甲醇一水作為溶劑體系，按3 :7:3: 5體積比將上述溶劑組分配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時間后，將上相（固定相）和下相（流動相）分開。

[0031] 稱取Ig紫杉醇粗提物，以50ml固定相加熱溶解待用。進樣前，用固定相存滿整個柱子，調整主機轉速，將流動相泵入柱內直至建立動態平衡，由進樣閥進樣；然后根據檢測圖譜，接收目標成分。目標餾分蒸干后用甲醇結晶可得到紫杉醇的白色細針狀結晶，經過 HPLC-UV的檢測，純度在99%以上。

[0032] 實施例3

[0033] 采用柱容積為5000ml的高速逆流色譜系統分離。選取石油醚一乙醚一乙醇一水作為溶劑體系，按70 ： 70 ： 30 ： 70體積比將上述溶劑組分配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時間后，將上相（固定相）和下相（流動相）分開。

[0034] 稱取5g紫杉醇粗提物，以250ml固定相加熱溶解待用。進樣前，用固定相存滿整個柱子，調整主機轉速，將流動相泵入柱內直至建立動態平衡，由進樣閥進樣；然后根據檢測圖譜，接收目標成分。目標餾分蒸干后用甲醇結晶可得到紫杉醇的白色細針狀結晶，經過 HPLC-UV的檢測，純度在99%以上。