專利基本信息
| 申請號 | CN201310754398.3 | 申請日 | 2013-12-31 |
| 公開（公告）號 | CN103804387A | 公開（公告）日 | 2014-05-21 |
| 申請公布號 | CN103804387A | 申請公布日 | 2014-05-21 |
| 分類號 | C07D493/04(2006.01)I | 分類 | 有機化學〔2〕 |
| 發明人 | 王維娜;鄧力 | 申請（專利權）人 | |
| 代理機構 | 上海泰能知識產權代理事務所 | 代理人 | 上海同田生物技術股份有限公司 |
| 地址 | 201203 上海市浦東新區張江高科技園區愛迪生路326號301室 | ||
| 摘要 | 本發明涉及一種高純度蟛蜞菊內酯的制備方法，包括：墨旱蓮原料粉碎，加入5-10倍量工業甲醇溶液超聲提取2-3次，提取液濃縮后用乙酸乙酯萃取，收集萃取液回收試劑加入硅膠柱吸附，用體積比為5:1～50:1的石油醚和乙酸乙酯等度洗脫，洗脫液濃縮得到粗提物，再用高速逆流色譜儀分離，紫外檢測器在線監測，收集流份減壓濃縮，結晶，干燥即得。本發明采用硅膠柱吸附，并使用石油醚和乙酸乙酯等度洗脫，操作簡便，回收率高，分離量大，低污染，得到的蟛蜞菊內酯純度高，具有良好的應用前景。 | ||
說明書
一種高純度蟛蜞菊內酯的制備方法
技術領域
[0001] 本發明屬于天然藥物化學領域，特別涉及一種高純度蟛蜞菊內酯的制備方法。
背景技術
[0002] 墨旱蓮(Eclipta prostrata L )俗稱旱蓮草，菊科鱧腸的地上干燥部分，為常用中藥之一，具有滋肝補腎，涼血止血之功能。國外研究認為，墨旱蓮抗肝毒的主要活性成分是香豆素類物質——膨蜞菊內酯與去甲蟛蜞菊內酯。這兩種成分對CCl4、GalNAc等所致大鼠肝損傷，均有明顯的肝保護作用，且以蟛蜞菊內酯的作用更強。蟛蜞菊內脂是墨旱蓮的主要有效成分，為墨旱蓮及其提取物的質量標準及檢測用重要特征性物質。
[0003] 蟛蜞菊內酯，CAS號524-12-9，分子式C16HltlO7，分子量314.25，分子結構式如下:
[0004]
[0005] 常規制備蟛蜞菊內酯的方法多為反復柱層析分離，存在占地面積大，溶劑大量使用，對環境和操作人員造成不良影響，且工藝重復性差，生產成本高登缺點。高速逆流色譜儀操作簡便，制備量大，樣品無損耗，分離效率高，低污染?，F已廣泛應用于生物，醫藥，環保等領域化學物質的制備分離和純化。
[0006] CN103265554A公開了一種去甲蟛蜞菊內酯的制備方法，墨旱蓮用甲醇溶液超聲提取、乙酸乙酯萃取后采用大孔樹脂吸附，然后用甲醇溶液洗脫，但是其得到的去甲蟛蜞菊內酯純度不高，仍需進一步改進。
發明內容
[0007] 本發明所要解決的技術問題是提供一種高純度蟛蜞菊內酯的制備方法，該方法采用硅膠柱吸附，并使用石油醚和乙酸乙酯等度洗脫，操作簡便，回收率高，分離量大，低污染，得到的蟛蜞菊內酯純度高，具有良好的應用前景。
[0008] 本發明的一種高純度蟛蜞菊內酯的制備方法，包括:
[0009] 墨旱蓮原料粉碎，加入5-10倍量工業甲醇溶液超聲提取2-3次，提取液濃縮后用乙酸乙酯萃取，收集萃取液回收試劑加入硅膠柱吸附，用體積比為5:1~50:1的石油醚和乙酸乙酯等度洗脫，洗脫液濃縮得到粗提物，再用高速逆流色譜儀分離，紫外檢測器在線監測，收集流份減壓濃縮，結晶，干燥即得；其中，高速逆流色譜儀所用溶劑為體積比為
0.1-2:1-3:0.5-4:1-3的正己烷、乙酸乙酯、乙醇和水。
[0010] 所述硅膠的規格為柱層析用100-500目。[0011] 所述高速逆流色譜儀分離條件為:取上相做固定相，下相為流動相，主機轉速為700-1000rpm，流速為 l_4ml/min，水浴溫度為 10_35°C。
[0012] 所述結晶采用甲醇、乙醇、水中的一種或兩種結晶。
[0013] 有益效果
[0014] 本發明采用硅膠柱吸附，并使用石油醚和乙酸乙酯等度洗脫，操作簡便，回收率高，分離量大，低污染，得到的蟛蜞菊內酯純度高；適用各種型號高速逆流色譜儀(HSCCC)和各種含量蟛蜞菊內酯的制備，易于實現產業化放大。
具體實施方式
[0015] 下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍。此外應理解，在閱讀了本發明講授的內容之后，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。
[0016] 實施例1
[0017] 墨旱蓮原料粉碎，稱2kg，每次加入10L50%甲醇溶液超聲提取30分鐘，提取3次，提取液減壓濃縮至1000ml，加等體積水飽和乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液回收乙酸乙酯得萃取物。萃取物用100-200目硅膠和乙酸乙酯拌樣，加入到硅膠柱層析，用石油醚/乙酸乙酯(體積比50:1)洗脫，洗脫液減壓濃縮得粗提物，用于高速逆流分離。取正己烷、乙酸乙酯、乙醇、水按體積比1:3:1:2混合，振搖后靜置分層。取上相注滿高速逆流色譜儀作為固定相，轉動主機，轉速800rpm,同時以2ml/min泵入下相做流動相,建立動態平衡后,用流動相溶解粗提物，由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監測，收集目標成分，連續制備，合并回收試劑，濃縮后甲醇結晶，得`到蟛蜞菊內酯3g，經HPLC檢測，含量98.9%，經UV、IR、MS、HNMR、CNMR等表征其物理性狀的數據與現有技術相一致。
[0018] 實施例2
[0019] 墨旱蓮原料粉碎，稱2kg，每次加入20L60%甲醇溶液超聲提取30分鐘，提取3次，提取液減壓濃縮至1000ml，加等體積水飽和乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液回收乙酸乙酯得萃取物。萃取物用100-200目硅膠和乙酸乙酯拌樣，加入到硅膠柱層析，用石油醚/乙酸乙酯(體積比40:1)洗脫，洗脫液減壓濃縮得粗提物，用于高速逆流分離。取正己烷、乙酸乙酯、乙醇、水按體積比0.5:2:1:3混合，振搖后靜置分層。取上相注滿高速逆流色譜儀作為固定相，轉動主機，轉速800rpm,同時以2ml/min泵入下相做流動相，建立動態平衡后,用流動相溶解粗提物，由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監測，收集目標成分，連續制備，合并回收試劑，濃縮后甲醇結晶，得到蟛蜞菊內酯3.2g，經HPLC檢測，含量98.6%，經UV、IR、MS、HNMR、CNMR等表征其物理性狀的數據與現有技術相一致。
[0020] 實施例3
[0021] 墨旱蓮原料粉碎，稱2kg，每次加入17L70%甲醇溶液超聲提取30分鐘，提取3次，提取液減壓濃縮至1000ml，加等體積水飽和乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液回收乙酸乙酯得萃取物。萃取物用100-200目硅膠和乙酸乙酯拌樣，加入到硅膠柱層析，用石油醚/乙酸乙酯(體積比15:1)洗脫，洗脫液減壓濃縮得粗提物，用于高速逆流分離。取正己烷、乙酸乙酯、乙醇、水按體積比0.5:1:1:2混合，振搖后靜置分層。取上相注滿高速逆流色譜儀作為固定相，轉動主機，轉速850rpm,同時以3ml/min泵入下相做流動相,建立動態平衡后,用流動相溶解粗提物，由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監測，收集目標成分，連續制備，合并回收試劑，濃縮后甲醇結晶，得到蟛蜞菊內酯3.9g，經HPLC檢測，含量98.3%，經UV、IR、MS、HNMR、CNMR等表征其物理性狀的數據與現有技術相一致。
[0022] 實施例4
[0023] 墨旱蓮原料粉碎，稱2kg，每次加入15L70%甲醇溶液超聲提取30分鐘，提取3次，提取液減壓濃縮至1000ml，加等體積水飽和乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液回收乙酸乙酯得萃取物。萃取物用100-200目硅膠和乙酸乙酯拌樣，加入到硅膠柱層析，用石油醚/乙酸乙酯(體積比5:1)洗脫，洗脫液減壓濃縮得粗提物，用于高速逆流分離。取正己烷、乙酸乙酯、乙醇、水按按體積比2:1:2:2.5混合，振搖后靜置分層。取上相注滿高速逆流色譜儀作為固定相，轉動主機，轉速900rpm,同時以3.5ml/min泵入下相做流動相,建立動態平衡后，用流動相溶解粗提物，由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監測，收集目標成分，連續制備，合并回收試劑，濃縮后甲醇結晶，得到蟛蜞菊內酯2.9g，經HPLC檢測，含量99.5%，經UV、IR、MS、HNMR、CNMR等表征 其物理性狀的數據與現有技術相一致。
