同田專利CN102030733B_一種高純度木香內酯和去氫木香內酯的制備方法

專利基本信息

說明書

一種高純度木香內酯和去氫木香內酯的制備方法

技術領域

[0001 ] 本發明屬于木香所含內酯的制備領域，特別涉及一種高純度木香內酯和去氫木香 內酯的制備方法。

背景技術

[0002] 木香為菊科云木香屬植物木香（Auckland ia IappaDecne)的干燥根，具行氣止 痛、健脾消食之功效，臨床上主要用于潰瘍病、膽絞痛、支氣管哮喘等疾病的治療。木香主要 含揮發油，其主要成分是木香烴內酯和去氫木香內酯，二者具有松弛平滑肌和解痙作用，是 木香的主要活性成分，也是木香質量控制的重要指標。木香內酯等內酯成分以及去內酯揮 發油均能對抗組胺、乙酰膽堿與氯化鋇引起的支氣管收縮作用，其中以二氫木香內酯作用 較強。

[0003] 木香內酯的結構式如下：

[0004]

[0005] 木香烴內酯的結構式如下

[0006]

[0007] 高速逆流色譜技術（High-SpeedCountercurrent Chromatography，HSCCC)是近 30年發展起來的一種連續的無需任何固體支持物的高效、快速的液液分配色譜分離技術， 其原理是利用螺旋柱在行星式的運動時產生的離心力，使互不相溶的兩相不斷混合，同時 保留其中的一相（固定相），利用恒流泵連續輸入另一相（流動相），隨流動相進入螺旋柱 的溶質在兩相之間反復分配，按分配系數的次序，被依次洗脫。在流動相中分配比例大的 先被洗脫，反之，在固定相中分配比例大的后被洗脫。傳統的液相色譜技術進行制備量分離 時，分配效率低，溶劑消耗量大，而且固態支持體或載體會帶來樣品被吸附、損耗和變性等 問題。而HSCCC能保證較高峰型分辨率，具有操作簡便，分離量大，樣品無損耗，分離效率 高，理論回收率為100%，重現性好和分離環境緩和等優點，現已廣泛應用于生物、醫藥、環 保等領域化學物質的制備分離和純化。

發明內容

[0008] 本發明所要解決的技術問題是提供一種高純度木香內酯和去氫木香內酯的制備 方法。該方法克服傳統分離技術的缺陷，采用高速逆流色譜法（HSCCC)制備高純度木香酯 和去氫木香內酯的方法，該方法操作簡便，回收率高，分離量大。

[0009] 本發明的一種高純度木香內酯和去氫木香內酯的制備方法，包括：

[0010] (1)將A組分、B組分、C組分和D組分按體積比1-5 : 0.5-1 : 1-5 : 5-10混合 后置于分液漏斗中，搖勻靜置分層，待平衡20-40分鐘后，將上相和下相分開，即得該溶劑 體系；其中A組分為乙酸甲酯、乙酸乙酯或乙酸丁酯；B組分為正丙醇或正丁醇；C組分為乙 醇或甲醇；D組分為水；

[0011] (2)選擇上相為固定相，下相為流動相，先用固定相充滿逆流色譜儀柱子，調節主 機轉速為600-1000rpm，將流動相以0. 5-5. Oml/min的流速泵入柱內，待整個體系建立動態 平衡后，由進樣閥進樣；

[0012] (3)根據檢測器紫外圖譜接收目標成分，將流分進行濃縮、結晶，得到木香內酯和 去氫木香內酯。

[0013] 上述溶劑體系優選為乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水體系。

[0014] 所述步驟（2)中所進的樣品的制備方法為：將木香提取物溶于上相和下相中。

[0015] 所述步驟⑴中的溶劑體系為乙酸乙酯-正丙醇-甲醇-水，該四組分的體積比依 次為：1 : I : 1 : 7;所述步驟（2)中的主機轉速850rpm，流動相泵入柱內的流速為5. Oml/ min〇

[0016] 所述步驟⑴中的溶劑體系為乙酸甲酯-正丙醇-乙醇-水，該四組分的體積比 依次為：4 : 0. 8 : 2 : 6;所述步驟（2)中的主機轉速950rpm，流動相泵入柱內的流速為 0· 5ml/min〇

[0017] 所述步驟⑴中的溶劑體系為乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水，該四組分的體積比 依次為：3 : 0. 5 : 1 : 8;所述步驟（2)中的主機轉速650rpm，流動相泵入柱內的流速為 3. Oml/min。

[0018] 所述步驟⑴中的溶劑體系為乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水，該四組分的體積比 依次為: 0. 7 : 2 : 9;所述步驟（2)中的主機轉速600rpm，流動相泵入柱內的流速為 L Oml/min。

[0019] 所述步驟⑴中的溶劑體系為乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水，該四組分的體積比 依次為：2 : 0.8 : 3 : 1;所述步驟（2)中的主機轉速700rpm，流動相泵入柱內的流速為 2. Oml/min。

[0020] 所述步驟⑴中的溶劑體系為乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水，該四組分的體積比 依次為：5 : 0. 5 : 4 : 7;所述步驟（2)中的主機轉速800rpm，流動相泵入柱內的流速為 3. Oml/min。所述步驟（1)中的溶劑體系為乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水，該四組分的體積 比依次為：4 : 1 : 4 : 5;所述步驟（2)中的主機轉速lOOOrpm，流動相泵入柱內的流速為 4. Oml/min。

[0021] 所述步驟（1)中的溶劑體系為乙酸丁酯-正丙醇-乙醇-水，該四組分的體積比依 次為：4 : I : 1 : 6;所述步驟（2)中的主機轉速750rpm，流動相泵入柱內的流速為4. Oml/ min〇

[0022] 根據溶解度常數，在不破壞體系平衡的情況下，調節A，B，C，D四組分的體積比。

[0023] 實驗條件適合溫度20_40°C，在上述溫度范圍內，溫度較高時，出峰時間略有提前， 分離效果變化不大，對峰形無多大影響。

[0024] 主機轉速和流速需控制在一定范圍內，按體積比將溶劑體系置于分液漏斗中，搖 勻靜置分層。待平衡一定時間后，將上相和下相分開，采用TBE-300B高速逆流色譜儀，該機 型柱體積為300ml，進樣圈為20ml，配有TBP-50A泵，TBD-23檢測器和N2000色譜工作站。 進樣前，先用固定相充滿整個柱子，調整主機轉速為600-1000rpm，以0. 5-5. Oml/min的流 速將流動相泵入柱內。

[0025] 高純度是指純度多98% ;分離和收集到的目標成分，濃縮到一定純度后要再進行 結晶得到單體。

[0026] 本發明采用了高速逆流色譜分離技術克服了固態支持物或載體不可逆吸附、損耗 和變性，使被分離物回收率高理論達100%，本發明實際達到95%以上，又因為采用優選的 溶劑體系，控制實驗條件溫度、調整主機轉速和流速的工藝條件，可以高效率的分離，獲得 高純度的木香內酯和去氫木香內酯（達到98%以上）。

[0027] 有益效果

[0028] 1、本發明采用了高速逆流色譜分離技術，保證較高峰形分辨度，分離量大、回收率 高、分離環境緩和、節約溶劑、操作簡便。

[0029] 2、本發明適合從各種工藝途徑制備的木香提取物獲得高純度的木香內酯和去氫 木香內酯（達到98%以上）。

具體實施方式

[0030] 下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明 而不用于限制本發明的范圍。此外應理解，在閱讀了本發明講授的內容之后，本領域技術人 員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定 的范圍。

[0031] 實施例1

[0032] 選取乙酸甲酯-正丙醇-乙醇-水體系在半制備型逆流色譜儀上來分離純化木香 內酯類成分。實驗條件適合溫度為25°C，先按4 : 0.8 : 2 : 6體積比將上述溶劑組分分 配置于分液漏斗中，振搖后靜置分層。待平衡一段時間后，將上相和下相分開。采用半制備 型逆流色譜儀，配有聚四氟乙烯柱，20ml進樣閥，柱容積為300ml，配有TBP-50A泵，TBD-23 檢測器和N2000色譜工作站。稱取IOOmg木香粗樣溶解于IOml上相和IOml下相溶液組成 的溶液中待用。進樣前，先用固定相充滿整個柱子，調整主機轉速為950rpm，以0. 5ml/min 的流速將流動相泵入柱內；待整個體系建立動態平衡后，由進樣閥進樣，然后根據檢測器紫 外圖譜，接收目標成分，得到木香內酯和去氫木香內酯流分，濃縮凍干后進行結晶，其HPLC 純度達到98. 8%。

[0033] 實施例2

[0034] 選取乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水體系在半制備型逆流色譜儀上來分離純化木香 內酯類成分。實驗條件適合溫度為30°C，先按3 : 0.5 : 1 : 8體積比將上述溶劑組分分配 置于分液漏斗中，振搖后靜置分層。待平衡一段時間后，將上相和下相分開。采用半制備型 逆流色譜儀，配有聚四氟乙烯柱，20ml進樣閥，柱容積為300ml，配有TBP-50A泵，TBD-23檢 測器和N2000色譜工作站。稱取150mg木香粗樣溶解于IOml上相和IOml下相溶液中待用。 進樣前，先用固定相充滿整個柱子，調整主機轉速為650rpm，以3. Oml/min的流速將流動相 泵入柱內；待整個體系建立動態平衡后，由進樣閥進樣，然后根據檢測器紫外圖譜，接收目 標成分，得到木香內酯和去氫木香內酯流分，濃縮后進行結晶，其HPLC純度達到98. 5%。

[0035] 實施例3

[0036] 選取乙酸丁酯-正丙醇-乙醇-水體系在半制備型逆流色譜儀上來分離純化木香 內酯類成分。實驗條件適合溫度為22°C，先按4 : I : 1 : 6體積比將上述溶劑組分分配 置于分液漏斗中，振搖后靜置分層。待平衡一段時間后，將上相和下相分開。采用半制備型 逆流色譜儀，配有聚四氟乙烯柱，20ml進樣閥，柱容積為300ml，配有TBP-50A泵，TBD-23檢 測器和N2000色譜工作站。稱取150mg木香粗樣溶解于IOml上相和IOml下相溶液中待 用。進樣前，先用固定相充滿整個柱子，調整主機轉速為750rpm，以4. Oml/min的流速將流 動相泵入柱內；待整個體系建立動態平衡后，由進樣閥進樣，然后根據檢測器紫外圖譜，接 收目標成分，得到木香內酯和去氫木香內酯流分，濃縮凍干后進行結晶，其HPLC純度達到 98. 9%〇

[0037] 實施例4

[0038] 選取乙酸乙酯-正丙醇-甲醇-水體系在半制備型逆流色譜儀上來分離純化木香 內酯類成分。實驗條件適合溫度為40°C，先按I : I : 1 : 7體積比將上述溶劑組分分配 置于分液漏斗中，振搖后靜置分層。待平衡一段時間后，將上相和下相分開。采用半制備型 逆流色譜儀，配有聚四氟乙烯柱，20ml進樣閥，柱容積為300ml，配有TBP-50A泵，TBD-23檢 測器和N2000色譜工作站。稱取IOOmg木香粗樣溶解于IOml上相和IOml下相溶液中待用。 進樣前，先用固定相充滿整個柱子，調整主機轉速為850rpm，以5. Oml/min的流速將流動相 泵入柱內；待整個體系建立動態平衡后，由進樣閥進樣，然后根據檢測器紫外圖譜，接收目 標成分，得到木香內酯和去氫木香內酯流分，濃縮后進行結晶，其HPLC純度達到98. 2%。

[0039] 實施例5

[0040] 選取乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水體系在半制備型逆流色譜儀上來分離純化木香 內酯類成分。實驗條件適合溫度為25°C，先按1 : 0.7 : 2 : 9體積比將上述溶劑組分分 配置于分液漏斗中，振搖后靜置分層。待平衡一段時間后，將上相和下相分開。采用半制備 型逆流色譜儀，配有聚四氟乙烯柱，20ml進樣閥，柱容積為300ml，配有TBP-50A泵，TBD-23 檢測器和N2000色譜工作站。稱取150mg木香粗樣溶解于IOml上相和IOml下相溶液中待 用。進樣前，先用固定相充滿整個柱子，調整主機轉速為600rpm，以1.0 ml/min的流速將流 動相泵入柱內；待整個體系建立動態平衡后，由進樣閥進樣，然后根據檢測器紫外圖譜，接 收目標成分，得到木香內酯和去氫木香內酯流分，濃縮后進行結晶，其HPLC純度達到98% 以上。

[0041] 實施例6

[0042] 選取乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水體系在半制備型逆流色譜儀上來分離純化木香 內酯類成分。實驗條件適合溫度為28°C，先按2 : 0.8 : 3 : 10體積比將上述溶劑組分分 配置于分液漏斗中，振搖后靜置分層。待平衡一段時間后，將上相和下相分開。采用半制備 型逆流色譜儀，配有聚四氟乙烯柱，20ml進樣閥，柱容積為300ml，配有TBP-50A泵，TBD-23 檢測器和N2000色譜工作站。稱取150mg木香粗樣溶解于IOml上相和IOml下相溶液中待 用。進樣前，先用固定相充滿整個柱子，調整主機轉速為700rpm，以2. Oml/min的流速將流 動相泵入柱內；待整個體系建立動態平衡后，由進樣閥進樣，然后根據檢測器紫外圖譜，接 收目標成分，得到木香內酯和去氫木香內酯流分，濃縮后進行結晶，其HPLC純度達到98% 以上。

[0043] 實施例7

[0044] 選取乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水體系在半制備型逆流色譜儀上來分離純化木香 內酯類成分。實驗條件適合溫度為35°C，先按5 : 0.5 : 4 : 7體積比將上述溶劑組分分 配置于分液漏斗中，振搖后靜置分層。待平衡一段時間后，將上相和下相分開。采用半制備 型逆流色譜儀，配有聚四氟乙烯柱，20ml進樣閥，柱容積為300ml，配有TBP-50A泵，TBD-23 檢測器和N2000色譜工作站。稱取150mg木香粗樣溶解于IOml上相和IOml下相溶液中待 用。進樣前，先用固定相充滿整個柱子，調整主機轉速為800rpm，以3. Oml/min的流速將流 動相泵入柱內；待整個體系建立動態平衡后，由進樣閥進樣，然后根據檢測器紫外圖譜，接 收目標成分，得到木香內酯和去氫木香內酯流分，濃縮后進行結晶，其HPLC純度達到98% 以上。

[0045] 實施例8

[0046] 選取乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水體系在半制備型逆流色譜儀上來分離純化木香 內酯類成分。實驗條件適合溫度為38°C，先按4 : 1 : 4 : 5體積比將上述溶劑組分分配 置于分液漏斗中，振搖后靜置分層。待平衡一段時間后，將上相和下相分開。采用半制備型 逆流色譜儀，配有聚四氟乙烯柱，20ml進樣閥，柱容積為300ml，配有TBP-50A泵，TBD-23檢 測器和N2000色譜工作站。稱取150mg木香粗樣溶解于IOml上相和IOml下相溶液中待用。 進樣前，先用固定相充滿整個柱子，調整主機轉速為lOOOrpm，以4. Oml/min的流速將流動 相泵入柱內；待整個體系建立動態平衡后，由進樣閥進樣，然后根據檢測器紫外圖譜，接收 目標成分，得到木香內酯和去氫木香內酯流分，濃縮后進行結晶，其HPLC純度達到98%以 上。