同田專利CN108164415A_一種從魚油中完全分離EPA和DHA的方法

專利基本信息

說明書

一種從魚油中完全分離EPA和DHA的方法

技術領域

[0001]本發明屬于不飽和脂肪酸加工技術領域，特別涉及一種從魚油中完全分離EPA和 DHA的方法。

背景技術

[0002] DHA (二十二碳六烯酸，Docosahexaenoic Acid)是一種《-3必需脂肪酸。研宄表明 DHA是人的大腦發育，成長的重要組成部分;在改善老年癡呆、抗衰老、抗腫瘤等方面有著重 要的生理調節功能。

[0003] EPA (二十碳五烯酸，Eicosapentaenoic Acid)是人體常用的幾種《-3脂肪酸之 一。EPA可幫助降低膽固醇和甘油三酯的含量，促進體內飽和脂肪酸代謝。防止脂肪在血管 壁的沉積，預防腦血栓、腦溢血、高血壓等心血管疾病。

[0004]魚油中含有豐富的DHA和EPA。人們先后發明采用了低溫分級法、溶劑提取法、尿素 包合法、分子蒸餾法和超臨界氣體萃取法等方法，從生物體中提取0脫和即八。

[0005]研宄發現，EPA會在嬰幼兒早期發育過程中破壞人體內DHa和EPA的平衡。因此，有 必要將EPA和DHA完全分離開來。

[0006]高速逆流色譜(HSCCC)技術是一種新的基于液液分配原理的分離純化技術，它不 需要任何固態支撐或載體，固定相和流動相皆為液體，無不可逆吸附。

發明內容

[00^7]本發明所要解決的技術問題是提供一種從魚油中完全分離EPA和DHA的方法，采用 了高速逆流色譜技術，分兩步溶劑體系從魚油中完全分離EPA和DHA，其中溶劑體系一可完 全分離EPA和DHA的混合物和其它雜質;溶劑體系二可完全分離EPA和DHA;得到高純度的EPA 和 DHA。

[0008]本發明的一種從魚油中完全分離EPA和DHA的方法，包括：

[0009] (1)將溶劑體系一充分振搖，靜置分相，分開收集上、下兩相;將魚油提取物溶解于 上相中，以上相為固定相，下相為流動相，采用高速逆流色譜進行分離，得到只含有EPA和 DHA的混合物與流動相的混合液，去除流動相，得到EPA和DHA的混合物;其中溶劑體系一由 正己烷或正庚烷，乙腈，甲醇按體積比為3?6:2?4:1?2混合而得；

[0010] (2)將溶劑體系二充分振搖，靜置分相，分開收集上、下兩相;將步驟（1)得到的混 合物溶解于上相中，以上相為固定相，下相為流動相，采用高速逆流色譜進行分離，分別得 至IJEPA與流動相的混合液和DHA與流動相的混合液，去除流動相，分別得到EPA和DHA產品；其 中溶劑體系一由正己纟元或正庚院，甲醇，去罔子水按體積比為15?30:10?20:2?4混合而 得。

[0011]所述步驟(1)和(2)中分開收集得到的上、下兩相進行超聲脫氣處理。 _2]所述步驟⑴中高速逆流色譜的條件為:轉向為正轉，轉速為_準;柱溫為25t：; 流動相的流速為5mL/min;檢測器的檢測波長為214nm。

[0013]所述步驟⑴中的去除流動相的工藝條件為:在45?c、_0.08MPa條件下進行旋轉蒸 發真空干燥。 _4]所述步驟⑵中高速逆流色譜的條件為:轉向為正轉，轉速S_rpm;柱溫為25t>c; 流動相的流速為lOmL/min;檢測器的檢測波長為214nm。

[0015]所述步驟(2)中的去除流動相的工藝條件為:在5(TC、-0.08MPa條件下進行旋轉茲 發真空干燥。

[0016] 有益效果

[0017] (1)本發明首次利用高速逆流色譜技術從魚油中同時分離純化得到高純度的即八 和 DHA。

[0018] (2)本發明的高速逆流色譜技術具有無樣品損耗、無污染、高效、大制備量，溶劑可 回收再利用等優點。

[0019] (3)本發明中采用的兩個溶劑體系的試劑皆可回收再利用，理論上EPA和DHA可實 現100%回收。

具體實施方式

[0020] 下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明 而不用于限制本發明的范圍。此外應理解，在閱讀了本發明講授的內容之后，本領域技術人 員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定 的范圍。

[0021]本發明實施例中采用的試劑與儀器如下：

[0022]試劑:正己烷、正庚烷、乙腈、甲醇均為國藥集團化學試劑有限公司生產的分析純 試劑，水為去離子水，魚油提取物為市售產品；

[0023]儀器:高速逆流色譜儀為上海同田生物技術股份有限公司生產的TBE-300C型號高 速逆流色譜儀。

[0024]實施例i

[0025] (1)將正己烷，乙腈，甲醇按體積比為6:4:1混合制得溶劑體系一，加入分液漏斗 中，充分振搖，靜置分相，獲得兩相混合液，分開收集上相和下相溶劑，分別置于超聲波振蕩 器中進行超聲脫氣處理，將魚油提取物溶解于上相溶劑中，然后以上相為固定相，下相為流 動相，采用高速逆流色譜進行分離，其中色譜條件設置為:正轉，轉速S800rpm;柱溫25; 流動相流速5mL/min;檢測器的檢測波長為214nm，得到只含有EPA和DHA的混合物與流動相 的混合液，置于旋轉蒸發器中，在水浴溫度45 X：、真空壓強-0 ? 08MPa條件下進行旋轉蒸發真 空干燥，去除流動相，得到EPA和DHA的混合物。

[0026] ⑵將正己烷，甲醇，去離子水按體積比為20:20:3混合制得溶劑體系二，加入分液 漏斗中，充分振搖，靜置分相，獲得兩相混合液，分開收集上相和下相溶劑，分別置于超聲波 振蕩器中進行超聲脫氣處理，將步驟（1)得到的EPA和DHA的混合物溶解于上相溶劑中，然后 以上相為固定相，下相為流動相，采用高速逆流色譜進行分離，其中色譜條件設置為:正轉， 轉速為SOOrpm;柱溫25。(：；流動相流速lOmL/min;檢測器的檢測波長為214nm，分別得到EPA 與流動相的混合液和DHA與流動相的混合液，置于旋轉蒸發器中，在水浴溫度5(rC、真空壓 強-0.08MPa條件下進行旋轉蒸發真空干燥，去除流動相，去除流動相，分別得到EPA和腿產 品。

[0027] 通過HPLC對本實施例獲得的EPA和DHA產品的純度進行分析，結果顯示:EPA純度為 99.62 % ; DHA純度為99.60 %。

[0028] 實施例2

[0029] (1)將正庚烷，乙腈，甲醇按體積比為6:4:1混合制得溶劑體系一，加入分液漏斗 中，充分振搖，靜置分相，獲得兩相混合液，分開收集上相和下相溶劑，分別置于超聲波振蕩 器中進行超聲脫氣處理，將魚油提取物溶解于上相溶劑中，然后以上相為固定相，下相為流 動相，采用高速逆流色譜進行分離，其中色譜條件設置為：正轉，轉速為800rpm;柱溫25。(：； 流動相流速5mL/min;檢測器的檢測波長為214nm，得到只含有EPA和DHA的混合物與流動相 的混合液，置于旋轉蒸發器中，在水浴溫度45°C、真空壓強-0. OSMPa條件下進行旋轉蒸發真 空干燥，去除流動相，去除流動相，得到EPA和DHA的混合物。

[0030] (2)將正庚烷，甲醇，去離子水按體積比為20:20:3混合制得溶劑體系二，加入分液 漏斗中，充分振搖，靜置分相，獲得兩相混合液，分開收集上相和下相溶劑，分別置于超聲波 振蕩器中進行超聲脫氣處理，將步驟⑴得到的EPA和DHA的混合物溶解于上相溶劑中，然后 以上相為固定相，下相為流動相，采用高速逆流色譜進行分離，其中色譜條件設置為:正轉， 轉速為8〇Orpm;柱溫25°C;流動相流速lOmL/min;檢測器的檢測波長為214nm，分別得到EPA 與流動相的混合液和DHA與流動相的混合液，置于旋轉蒸發器中，在水浴溫度50 °C、真空壓 強-0.08MPa條件下進行旋轉蒸發真空干燥，去除流動相，分別得到EpA和藤產品。

[0031]通過HPLC對本實施例獲得的Epa和DHA產品的純度進行分析，結果顯示:EPA純度為 96.57%;〇骱純度為97.18%。