專利基本信息

說(shuō)明書

一種高純度芍藥苷和白芍苷的制備方法

技術(shù)領(lǐng)域

[0001] 本發(fā)明屬于天然藥物提取分離領(lǐng)域，特別涉及一種高純度芍藥苷和白芍苷的制備 方法。

背景技術(shù)

[0002] 茍藥苷(paeoniflorin)和白茍苷(又稱茍藥內(nèi)酯苷，albiflorin)是一種單碗苷類 成份，在牡丹科植物中普遍存在，是傳統(tǒng)中藥白芍、赤芍、牡丹皮中的主要有效成份和質(zhì)量 控制標(biāo)準(zhǔn)，具有多種藥理作用和用途，白勺總苷在中國(guó)是一種治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物， 芍藥苷和白芍苷可作為有效成份應(yīng)用于相關(guān)的藥品和功能食品領(lǐng)域。

[0003] 芍藥苷和白芍苷的制備工藝相關(guān)研究文獻(xiàn)主要集中如下:游松等（中國(guó)專利申請(qǐng) 號(hào)02133298.3)公開了一種“芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的組合物及其制備方法”，所述組合物從 芍藥中提取分離得到，其中芍藥苷與芍藥內(nèi)酯苷在該組合物中的比例為7:3?9:1，其制備 工藝主要通過(guò)吸附樹脂精制、氧化鋁柱層析和硅膠柱層析制得。張現(xiàn)濤等（中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?200510041212.5)公開了一種“芍藥苷提取物的制備方法”，所述工藝主要采用乙醇提取赤 芍藥材，上大孔樹脂后，乙醇洗脫，洗脫液濃縮后上聚酰胺樹脂，得含量90 %以上芍藥苷。朱 靜建等（中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?2110973.7)公開了一種“芍藥中甙類化合物單體、提取和分離的 方法”，所述成份包括芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、苯甲酰芍藥苷和羥基芍藥苷，其方法主要采用白 芍或赤芍在醇水溶液中溶脹，加熱回流，濃縮至浸膏，用丙酮溶液超聲提取，濃縮，硅膠拌 樣，上真空色譜柱粗分，再經(jīng)硅膠柱反復(fù)進(jìn)行分配色譜獲得。石任兵等（中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?200710111231. X)公開了一種“芍藥總苷提取物及其制備方法”，所述提取物主要包括芍藥 苷、白芍藥苷、芍藥新苷、芍藥內(nèi)酯A、B、C、氧化芍藥苷、苯甲酰芍藥苷及其衍生物等，可從芍 藥科各植物部位中制備。徐娟等（中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?015103908662)公開了一種“芍藥苷單體 的提取方法”所述提取方法為以酸性水溶液為溶劑、結(jié)合超聲-微波相結(jié)合的組合萃取技術(shù) 對(duì)芍藥苷單體進(jìn)行提取，與傳統(tǒng)的柱層析或大孔樹脂吸附法相比具有如下明顯優(yōu)點(diǎn):a)具 有快速、徹底、效率高的優(yōu)點(diǎn)，在生產(chǎn)過(guò)程中可縮短生產(chǎn)周期和提高芍藥苷的提取率。劉江 云等（中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?01110410067.9)公開了一種“茍藥苷和白芍苷的制備方法”采用乙 醇提取藥材，上大孔樹脂柱，乙醇洗脫，所得精致物上硅膠柱，得到純度大于90 %的芍藥苷 和白茍昔成品。

[0004] 目前，采用大孔樹脂技術(shù)純化芍藥總苷的工藝較為成熟，但芍藥苷和白芍苷不好 分開，采用硅膠柱層析柱效低，裝柱差異性大，不宜重復(fù)和放大，且白芍苷含量低，用常規(guī)柱 層析，回收率低，提高了生產(chǎn)成本。高速逆流色譜（High-speed countercurrent chromatography，HSCCC)作為一種新型分離純化技術(shù)，操作方便，快捷，分離度較高，克服了 由固相載體帶來(lái)的樣品結(jié)合、失活、污染等缺點(diǎn)。已被廣泛應(yīng)用于天然產(chǎn)物活性成分的分離 制備和總草藥的分析鑒定。

[0005] 芍藥苷和白芍苷結(jié)構(gòu)式如下：

發(fā)明內(nèi)容

[0007] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種高純度芍藥苷和白芍苷的制備方法，該方 法制備芍藥苷和白芍苷，產(chǎn)品純度高，品質(zhì)好，適用于各種型號(hào)高速逆流色譜儀，易于產(chǎn)業(yè) 化放大。

[0008] 本發(fā)明的一種高純度芍藥苷和白芍苷的制備方法，包括：

[0009] (1)將粉碎后的含有芍藥苷和白芍苷的牡丹科植物原料，以固液質(zhì)量比1: 5-10加 入乙醇溶液，超聲提取，濃縮提取液得到浸膏;將浸膏按固液質(zhì)量比1:100-150用水溶解，萃 取，減壓濃縮得到萃取物；

[0010] (2)采用柱色譜，以大孔樹脂為填料，醇水溶液洗脫上述萃取物，收集含有芍藥苷 和白芍苷的流份，濃縮，干燥，得到粗提物；

[0011] (3)對(duì)上述粗提物采用高速逆流色譜法分離，高速逆流色譜的溶劑系統(tǒng)由三氯化 碳、丁醇、甲醇和水按體積比4:1-2:2-3:1組成；紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，收集流份減壓濃縮， 結(jié)晶，干燥，得到芍藥苷和白芍苷。

[0012] 所述步驟⑴中的乙醇的體積分?jǐn)?shù)為30-90%。

[0013] 所述步驟⑴中的超聲提取次數(shù)為2?3次。

[0014] 所述步驟⑴中的萃取所用溶劑為乙酸乙酯。

[0015] 所述步驟⑵中的醇水溶液為體積分?jǐn)?shù)20-30 %的乙醇水溶液。

[0016] 所述步驟⑶中的高速逆流色譜的分離條件為：主機(jī)轉(zhuǎn)速750-1000rpm/min，流動(dòng) 相2 · 5-15 · Oml/min，水浴溫度 10-35°C。

[0017] 所述步驟⑶中的溶劑系統(tǒng)的上相為固定相，下相為流動(dòng)相。

[0018] 本發(fā)明將樣品進(jìn)行特殊簡(jiǎn)便預(yù)處理，使的樣品中芍藥苷和白芍苷純度提高，上樣 量可以增加，同時(shí)制備高純度的(含量大于95%)芍藥苷和白芍苷兩種物質(zhì)，提高了產(chǎn)能。

[0019] 有益效果

[0020] (1)本發(fā)明分離方法簡(jiǎn)便，快捷，分離周期短，可以短時(shí)間內(nèi)分離制備高純度芍藥 苷和白芍苷。傳統(tǒng)的柱色譜方法操作繁瑣，需要反復(fù)的進(jìn)行柱層析分離，分離周期長(zhǎng)，目標(biāo) 成分死吸附嚴(yán)重。

[0021] (2)本發(fā)明單體制備量大，根據(jù)所需芍藥苷和白芍苷的質(zhì)量，可以調(diào)節(jié)被分離樣品 的進(jìn)樣量，采用制備型高速逆流色譜儀，工藝重現(xiàn)性好，產(chǎn)品純度高，具有良好的應(yīng)用前景。

附圖說(shuō)明

[0022] 圖1為實(shí)施例IHSCCC分離得到的芍藥苷和白芍苷的高速逆流色譜色譜圖。

具體實(shí)施方式

[0023] 下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人 員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定 的范圍。

[0024] 實(shí)施例1

[0025] 取經(jīng)干燥的牡丹科植物原料粉碎，稱IOOOg，每次加入IOL 80%乙醇溶液超聲提取 60分鐘，提取3次，提取液減壓濃縮得到浸膏200g。按1質(zhì)量份浸膏加入100質(zhì)量份水溶解，乙 酸乙酯萃取，共萃取3次，合并萃取液回收乙酸乙酯得萃取物40g，萃取物上苯乙烯系大孔樹 脂柱，以體積分?jǐn)?shù)25 %的乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥得粗提物，用于高速逆流 分咼。

[0026] 在分液漏斗里配制三氯化碳、正丁醇、甲醇、水兩相溶劑體系，按體積比4:2:1:1混 合，振搖后靜置分層，超聲脫氣30min。取上相注滿高速逆流色譜儀作為固定相，轉(zhuǎn)動(dòng)主機(jī)， 轉(zhuǎn)速800rpm，同時(shí)以5ml/min栗入下相做流動(dòng)相，水浴溫度為30 °C，建立動(dòng)態(tài)平衡后，用流動(dòng) 相溶解粗提物，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在254nm波長(zhǎng)下在線監(jiān)測(cè)，收集各目標(biāo)成分，連續(xù) 制備，相應(yīng)合并回收試劑，濃縮后干燥，從IOOOmg粗提物中分離得到高純度的芍藥苷和白芍 苷250mg和100mg。經(jīng)HPLC檢測(cè)，含量分別為98.8%和98.2%，經(jīng)群、11?、]^、!1匪1?、0匪1?等表征 其物理性狀的數(shù)據(jù)與現(xiàn)有技術(shù)相一致。

[0027] 實(shí)施例2

[0028] 取經(jīng)干燥的牡丹科植物原料粉碎，稱IOOOg，每次加入IOL 60%乙醇溶液超聲提取 60分鐘，提取3次，提取液減壓濃縮得到浸膏200g。按1質(zhì)量份浸膏加入100質(zhì)量份水溶解，乙 酸乙酯萃取，共萃取3次，合并萃取液回收乙酸乙酯得萃取物40g，萃取物上苯乙烯系A(chǔ)B-8大 孔樹脂柱，以體積分?jǐn)?shù)25 %的乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥得粗提物，用于高速 逆流分離。

[0029] 在分液漏斗里配制三氯化碳、正丁醇、甲醇、水兩相溶劑體系，按體積比4:1:3: 2混 合，振搖后靜置分層，超聲脫氣30min。取上相注滿高速逆流色譜儀作為固定相，轉(zhuǎn)動(dòng)主機(jī)， 轉(zhuǎn)速800rpm，同時(shí)以8ml/min栗入下相做流動(dòng)相，水浴溫度為20°C，建立動(dòng)態(tài)平衡后，用流動(dòng) 相溶解粗提物，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在254nm波長(zhǎng)下在線監(jiān)測(cè)，收集各目標(biāo)成分，連續(xù) 制備，相應(yīng)合并回收試劑，濃縮后干燥，從IOOOmg粗提物中分離得到高純度的芍藥苷和白芍 苷250mg和100mg。經(jīng)HPLC檢測(cè)，含量分別為98.4%和97.2%，經(jīng)群、11?、]^、!1匪1?、0匪1?等表征 其物理性狀的數(shù)據(jù)與現(xiàn)有技術(shù)相一致。

[0030] 實(shí)施例3

[0031] 取經(jīng)干燥的牡丹科植物原料粉碎，稱1000g，每次加入IOL 70%乙醇溶液超聲提取 60分鐘，提取3次，提取液減壓濃縮得到浸膏300g。按1質(zhì)量份浸膏加入100質(zhì)量份水溶解，乙 酸乙酯萃取，共萃取3次，合并萃取液回收乙酸乙酯得萃取物50g，萃取物上苯乙烯系A(chǔ)B-8大 孔樹脂柱，以體積分?jǐn)?shù)50 %的乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥得粗提物，用于高速 逆流分離。

[0032] 在分液漏斗里配制三氯化碳、異丁醇、甲醇、水兩相溶劑體系，按體積比4:2:2:1混 合，振搖后靜置分層，超聲脫氣30min。取上相注滿高速逆流色譜儀作為固定相，轉(zhuǎn)動(dòng)主機(jī)， 轉(zhuǎn)速800rpm，同時(shí)以lOml/min栗入下相做流動(dòng)相，水浴溫度為25 °C，建立動(dòng)態(tài)平衡后，用流 動(dòng)相溶解粗提物，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在254nm波長(zhǎng)下在線監(jiān)測(cè)，收集各目標(biāo)成分，連 續(xù)制備，相應(yīng)合并回收試劑，濃縮后干燥，從IOOOmg粗提物中分離得到高純度的芍藥苷和白 芍苷230mg和110mg。經(jīng)HPLC檢測(cè)，含量分別為97.1 %和96.5 %，經(jīng)UV、IR、MS、HNMR、CNMR等表 征其物理性狀的數(shù)據(jù)與現(xiàn)有技術(shù)相一致。