同田專利CN105273015B_一種高純度芍藥苷和白芍苷的制備方法

專利基本信息

說明書

一種高純度芍藥苷和白芍苷的制備方法

技術領域

[0001] 本發明屬于天然藥物提取分離領域，特別涉及一種高純度芍藥苷和白芍苷的制備 方法。

背景技術

[0002] 茍藥苷(paeoniflorin)和白茍苷(又稱茍藥內酯苷，albiflorin)是一種單碗苷類 成份，在牡丹科植物中普遍存在，是傳統中藥白芍、赤芍、牡丹皮中的主要有效成份和質量 控制標準，具有多種藥理作用和用途，白勺總苷在中國是一種治療類風濕性關節炎的藥物， 芍藥苷和白芍苷可作為有效成份應用于相關的藥品和功能食品領域。

[0003] 芍藥苷和白芍苷的制備工藝相關研究文獻主要集中如下:游松等（中國專利申請 號02133298.3)公開了一種“芍藥苷和芍藥內酯苷的組合物及其制備方法”，所述組合物從 芍藥中提取分離得到，其中芍藥苷與芍藥內酯苷在該組合物中的比例為7:3?9:1，其制備 工藝主要通過吸附樹脂精制、氧化鋁柱層析和硅膠柱層析制得。張現濤等（中國專利申請號 200510041212.5)公開了一種“芍藥苷提取物的制備方法”，所述工藝主要采用乙醇提取赤 芍藥材，上大孔樹脂后，乙醇洗脫，洗脫液濃縮后上聚酰胺樹脂，得含量90 %以上芍藥苷。朱 靜建等（中國專利申請號02110973.7)公開了一種“芍藥中甙類化合物單體、提取和分離的 方法”，所述成份包括芍藥苷、芍藥內酯苷、苯甲酰芍藥苷和羥基芍藥苷，其方法主要采用白 芍或赤芍在醇水溶液中溶脹，加熱回流，濃縮至浸膏，用丙酮溶液超聲提取，濃縮，硅膠拌 樣，上真空色譜柱粗分，再經硅膠柱反復進行分配色譜獲得。石任兵等（中國專利申請號 200710111231. X)公開了一種“芍藥總苷提取物及其制備方法”，所述提取物主要包括芍藥 苷、白芍藥苷、芍藥新苷、芍藥內酯A、B、C、氧化芍藥苷、苯甲酰芍藥苷及其衍生物等，可從芍 藥科各植物部位中制備。徐娟等（中國專利申請號2015103908662)公開了一種“芍藥苷單體 的提取方法”所述提取方法為以酸性水溶液為溶劑、結合超聲-微波相結合的組合萃取技術 對芍藥苷單體進行提取，與傳統的柱層析或大孔樹脂吸附法相比具有如下明顯優點:a)具 有快速、徹底、效率高的優點，在生產過程中可縮短生產周期和提高芍藥苷的提取率。劉江 云等（中國專利申請號201110410067.9)公開了一種“茍藥苷和白芍苷的制備方法”采用乙 醇提取藥材，上大孔樹脂柱，乙醇洗脫，所得精致物上硅膠柱，得到純度大于90 %的芍藥苷 和白茍昔成品。

[0004] 目前，采用大孔樹脂技術純化芍藥總苷的工藝較為成熟，但芍藥苷和白芍苷不好 分開，采用硅膠柱層析柱效低，裝柱差異性大，不宜重復和放大，且白芍苷含量低，用常規柱 層析，回收率低，提高了生產成本。高速逆流色譜（High-speed countercurrent chromatography，HSCCC)作為一種新型分離純化技術，操作方便，快捷，分離度較高，克服了 由固相載體帶來的樣品結合、失活、污染等缺點。已被廣泛應用于天然產物活性成分的分離 制備和總草藥的分析鑒定。

[0005] 芍藥苷和白芍苷結構式如下：

發明內容

[0007] 本發明所要解決的技術問題是提供一種高純度芍藥苷和白芍苷的制備方法，該方 法制備芍藥苷和白芍苷，產品純度高，品質好，適用于各種型號高速逆流色譜儀，易于產業 化放大。

[0008] 本發明的一種高純度芍藥苷和白芍苷的制備方法，包括：

[0009] (1)將粉碎后的含有芍藥苷和白芍苷的牡丹科植物原料，以固液質量比1: 5-10加 入乙醇溶液，超聲提取，濃縮提取液得到浸膏;將浸膏按固液質量比1:100-150用水溶解，萃 取，減壓濃縮得到萃取物；

[0010] (2)采用柱色譜，以大孔樹脂為填料，醇水溶液洗脫上述萃取物，收集含有芍藥苷 和白芍苷的流份，濃縮，干燥，得到粗提物；

[0011] (3)對上述粗提物采用高速逆流色譜法分離，高速逆流色譜的溶劑系統由三氯化 碳、丁醇、甲醇和水按體積比4:1-2:2-3:1組成；紫外檢測器在線監測，收集流份減壓濃縮， 結晶，干燥，得到芍藥苷和白芍苷。

[0012] 所述步驟⑴中的乙醇的體積分數為30-90%。

[0013] 所述步驟⑴中的超聲提取次數為2?3次。

[0014] 所述步驟⑴中的萃取所用溶劑為乙酸乙酯。

[0015] 所述步驟⑵中的醇水溶液為體積分數20-30 %的乙醇水溶液。

[0016] 所述步驟⑶中的高速逆流色譜的分離條件為：主機轉速750-1000rpm/min，流動 相2 · 5-15 · Oml/min，水浴溫度 10-35°C。

[0017] 所述步驟⑶中的溶劑系統的上相為固定相，下相為流動相。

[0018] 本發明將樣品進行特殊簡便預處理，使的樣品中芍藥苷和白芍苷純度提高，上樣 量可以增加，同時制備高純度的(含量大于95%)芍藥苷和白芍苷兩種物質，提高了產能。

[0019] 有益效果

[0020] (1)本發明分離方法簡便，快捷，分離周期短，可以短時間內分離制備高純度芍藥 苷和白芍苷。傳統的柱色譜方法操作繁瑣，需要反復的進行柱層析分離，分離周期長，目標 成分死吸附嚴重。

[0021] (2)本發明單體制備量大，根據所需芍藥苷和白芍苷的質量，可以調節被分離樣品 的進樣量，采用制備型高速逆流色譜儀，工藝重現性好，產品純度高，具有良好的應用前景。

附圖說明

[0022] 圖1為實施例IHSCCC分離得到的芍藥苷和白芍苷的高速逆流色譜色譜圖。

具體實施方式

[0023] 下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明 而不用于限制本發明的范圍。此外應理解，在閱讀了本發明講授的內容之后，本領域技術人 員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定 的范圍。

[0024] 實施例1

[0025] 取經干燥的牡丹科植物原料粉碎，稱IOOOg，每次加入IOL 80%乙醇溶液超聲提取 60分鐘，提取3次，提取液減壓濃縮得到浸膏200g。按1質量份浸膏加入100質量份水溶解，乙 酸乙酯萃取，共萃取3次，合并萃取液回收乙酸乙酯得萃取物40g，萃取物上苯乙烯系大孔樹 脂柱，以體積分數25 %的乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥得粗提物，用于高速逆流 分咼。

[0026] 在分液漏斗里配制三氯化碳、正丁醇、甲醇、水兩相溶劑體系，按體積比4:2:1:1混 合，振搖后靜置分層，超聲脫氣30min。取上相注滿高速逆流色譜儀作為固定相，轉動主機， 轉速800rpm，同時以5ml/min栗入下相做流動相，水浴溫度為30 °C，建立動態平衡后，用流動 相溶解粗提物，由進樣閥進樣，紫外檢測器在254nm波長下在線監測，收集各目標成分，連續 制備，相應合并回收試劑，濃縮后干燥，從IOOOmg粗提物中分離得到高純度的芍藥苷和白芍 苷250mg和100mg。經HPLC檢測，含量分別為98.8%和98.2%，經群、11?、]^、!1匪1?、0匪1?等表征 其物理性狀的數據與現有技術相一致。

[0027] 實施例2

[0028] 取經干燥的牡丹科植物原料粉碎，稱IOOOg，每次加入IOL 60%乙醇溶液超聲提取 60分鐘，提取3次，提取液減壓濃縮得到浸膏200g。按1質量份浸膏加入100質量份水溶解，乙 酸乙酯萃取，共萃取3次，合并萃取液回收乙酸乙酯得萃取物40g，萃取物上苯乙烯系AB-8大 孔樹脂柱，以體積分數25 %的乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥得粗提物，用于高速 逆流分離。

[0029] 在分液漏斗里配制三氯化碳、正丁醇、甲醇、水兩相溶劑體系，按體積比4:1:3: 2混 合，振搖后靜置分層，超聲脫氣30min。取上相注滿高速逆流色譜儀作為固定相，轉動主機， 轉速800rpm，同時以8ml/min栗入下相做流動相，水浴溫度為20°C，建立動態平衡后，用流動 相溶解粗提物，由進樣閥進樣，紫外檢測器在254nm波長下在線監測，收集各目標成分，連續 制備，相應合并回收試劑，濃縮后干燥，從IOOOmg粗提物中分離得到高純度的芍藥苷和白芍 苷250mg和100mg。經HPLC檢測，含量分別為98.4%和97.2%，經群、11?、]^、!1匪1?、0匪1?等表征 其物理性狀的數據與現有技術相一致。

[0030] 實施例3

[0031] 取經干燥的牡丹科植物原料粉碎，稱1000g，每次加入IOL 70%乙醇溶液超聲提取 60分鐘，提取3次，提取液減壓濃縮得到浸膏300g。按1質量份浸膏加入100質量份水溶解，乙 酸乙酯萃取，共萃取3次，合并萃取液回收乙酸乙酯得萃取物50g，萃取物上苯乙烯系AB-8大 孔樹脂柱，以體積分數50 %的乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥得粗提物，用于高速 逆流分離。

[0032] 在分液漏斗里配制三氯化碳、異丁醇、甲醇、水兩相溶劑體系，按體積比4:2:2:1混 合，振搖后靜置分層，超聲脫氣30min。取上相注滿高速逆流色譜儀作為固定相，轉動主機， 轉速800rpm，同時以lOml/min栗入下相做流動相，水浴溫度為25 °C，建立動態平衡后，用流 動相溶解粗提物，由進樣閥進樣，紫外檢測器在254nm波長下在線監測，收集各目標成分，連 續制備，相應合并回收試劑，濃縮后干燥，從IOOOmg粗提物中分離得到高純度的芍藥苷和白 芍苷230mg和110mg。經HPLC檢測，含量分別為97.1 %和96.5 %，經UV、IR、MS、HNMR、CNMR等表 征其物理性狀的數據與現有技術相一致。